液相色譜柱科普知識(shí)大全，你真不一定都懂

　　液相色譜柱的選擇應(yīng)根據(jù)目標(biāo)分析物的分子量大小、溶解性、Pka值，以及分離要求、儀器、成本等各方面來考慮，比如說可以根據(jù)分離目的選色譜柱，對(duì)映體分離常選擇手性柱，離子化色譜可選擇離子柱，蛋白多肽、DNA可選擇凝膠柱或離子交換柱，一般的小分子化合物可選擇普通反相柱，如C18、C8柱、苯基柱等等。

　　根據(jù)實(shí)際需求和設(shè)備選擇填料粒徑，普通HPLC一般選擇5μm或3.5μm粒徑的色譜柱，而UPLC則常使用1.7μm——3.5μm的色譜柱。比表面積，高比表面積有助于分離，低比表面積更適合梯度洗脫程序。

　　液相色譜柱的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)擴(kuò)展：

　　1）平均顆粒度，顆粒度分布顆粒度(dp)越小：柱效越高(傳質(zhì)好，渦流擴(kuò)散小)柱壓越高(滲透性差)顆粒分布

　　顆粒分布越寬∶柱效低(滲透性差)

　　顆粒形狀球型∶柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻

　　無定型：柱床結(jié)構(gòu)不均勻流動(dòng)相線性速度不均勻，譜帶擴(kuò)展

　　2）鍵合相化學(xué)

　　1.影響化合物的分離度

　　2.不同鍵合相對(duì)不同種類的化合物分離不同

　　3.可能導(dǎo)致色譜的分離機(jī)理不同如：C18、C8、CN

　　3）含碳量

　　1.含碳量越高，k‘值越大（固定相傳質(zhì)效應(yīng)增加）

　　2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分離、水解穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性好、有利于極性化合物的拖尾改善

　　3.低含碳量 有利于分析中性及堿性化合物、降低溶劑損耗、填料的端基封口、封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）

　　4）填料的端基封口

　　封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）

　　5）硅膠的活性

　　主要影響堿性化合物的保留行為：k'，生產(chǎn)硅膠時(shí)處理溫度不同，硅膠活性也不同，是選擇性差異的主要來源，硅膠的雜質(zhì)含量，重金屬含量低，硅羥基活性小，拖尾減小，是色譜柱質(zhì)量好壞的重要標(biāo)志，填料的穩(wěn)定性，硅膠填料，pH：2-8，聚合物填料，pH：2-12，pH值小于2時(shí)，鍵合相水解，液相色譜法能否將某一樣品*分離，主要取決于液相色譜柱的選擇性和柱效，這在很大程度上取決于固定相的選擇是否適當(dāng)。